pcr缓冲液成分作用,pcr缓冲液成分作用是什么,

pcr缓冲液成分作用是什么PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分： 1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系； 2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子； 3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整； 4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。PCR缓冲液是什么缓冲液有聚合酶需要的镁离子，还可以使反应体系处于酶反应时适合的PH，实际上就是给酶创造一个最适合的反应环境以使它的活性能达到最佳状态，如果你不加buffer，酶是没有活性的。一般酶和缓冲液是配套的，买酶的时候是在一起的 pcr缓冲液成分作用是什么意思就是给PCR提供的一个最适酶催反应条件。不同公司的buffer缓冲液都是不一样的，像离子浓度、PH等都有很大的差别。我们实验室用的是诺唯赞的PCR酶，上次我好奇打了他们的技术热线，大概都有些KCl、MgCl2、(NH4)2SO4、Tris-HCl等。 希望对你有帮助！pcr反应液是什么无菌水是比较好的溶液，里面几乎不含有什么离子和酶等物质，TE是tris盐酸溶解液，通常比较长期保存的DNA可以用TE来溶解，但是TE会对PCR反应有抑制作用pcr反应液的成分及作用PCR的热盖包括非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热和自动式热盖四种。很久之前的PCR仪是没有热盖的，为了避免PCR反应液蒸发，会将石蜡油（或矿物油）加入到PCR反应液中。然而，当反应完成后，不容易将石蜡油清除干净。之后，带热盖的PCR仪出现了，热盖的作用是为了避免蒸发的水汽在管盖上凝结。反应液中，有一部分水分不会在管盖上管盖上凝结，而是变为蒸汽留在管内。热盖作用目前的PCR仪一般都配备PCR仪，能够使得样品管顶部温度达到150℃左右。防止蒸发的反应液在管盖凝集从而使得PCR反应体积遭到改变，没有必要加入石蜡油，使得后续实验的麻烦减少。pcr反应液缓冲液PCR 反应体系主要由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA 聚合酶、靶序列DNA 和PCR 反应缓冲液体系组成设计PCR 引物时的一般原则(1)引物长度- 一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。(2) 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布，G/C 含量在45%~ 55% 之间，引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布，避免嘌呤、嘧啶的连续排列。(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互补，使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对，并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。(6) 引物5' 端碱基可不与模板匹配，可添加与模板无关的序列(如限制性内切酶的识别pcr缓冲液的成分与作用现在用于PCR的酶主要为来源于高度嗜热菌（主要为Thermus属）或超高度嗜热菌（主要为Thermococcus属、Pyrococcus属等的Euryarchaeota）的耐热性聚合酶。前者如Taq、Tth DNA聚合酶，后者如KOD、Pfu DNA聚合酶等。虽然从同源性来看，聚合酶至少分为六个Family。但一般把从高度嗜热菌中分离出来的聚合酶与大肠杆菌的PolymeraseⅠ分为同一族（A Family），把从archaea中分离出来的聚合酶与真核生物的Polymerase α、δ、ε等分为同一族（B Family）。分别被称为PolⅠ型和α 型。被分在同一族的聚合酶从系统树分析来看，的确靠得很近，但酶的性质和作用却各有不同。虽说如此，在耐热性聚合酶中，被分为同一Family的酶大致上仍显示出很相似的性质，这也是选择酶时的指标之一。pcr缓冲液相当于细胞内什么成分PCR反应中缓冲液是一个重要的影响因素，特别是其中的Mg2+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。目前最为常用的缓冲体系为l0～50mmol／L的Tris—HCl(pH8．2～8．3，20℃)，PCR标准缓冲液含有10mmol／L的Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L的KCl、1．5mmol／L的Mg2+、0.1g／L的明胶。在一般的PCR反应中，1．5～2．0μmol／L Mg2+是比较合适的(对应dNTP浓度为200μmol／L左右)。Mg2+过量能增加非特异扩增并影响产率。现在认为限制KCl和明胶的用量值得提倡，尤其是BSA，虽其对酶有一定保护性，如果质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。KCl在50mmol／L时能促进引物退火，大于此浓度时将会抑制聚合酶的活性。有的反应液以氯化铵或醋酸铵中的NH+才代替K+，其浓度为16．6mmol／L。在PCR中使用10～50mmol／L Tris HCl，主要靠其调节pH使Taq DNA聚合酶的作用环境维持偏碱性。Tris缓冲液是一种双极化离子缓冲液，pKa为8．3(20℃)，△pKa为一0.021／℃。在反应体系中加入适量(10％)的二甲基亚砜(DMSO)，虽然DMSO对聚合酶活性有一定抑制作用，但它可减少模板二级结构，提高PCR反应特异性。有报道指出甲酰胺或氯化四甲基铵(TMAC)均可提高反应特异性，而对酶活性没有明显影响。PCR标准缓冲液对大多数模板DNA及引物都是适用的，但对某一特定模板和引物的组合，标准缓冲液并不一定就是最佳条件，因此各实验室可在此条件上，根据具体扩增项目进行改进。其中Mg2+浓度对扩增作用的特异性和产量有明显影响。Taq酶是一种Mg2+依赖酶，Mg2+浓度一般为1．5mmol／L左右，Mg2+浓度过低时，酶活力明显降低；过高时，酶可催化非特异性扩增。由于反应体系中的DNA模板、引物和dNTP都可能与Mg2+结合，因此降低了Mg2+的实际浓度。所以建议反应中Mg2+用量至少要比dNTP浓度高O．5～1．0mmol／L。版权声明：以上内容作者已申请原创保护，未经允许不得转载，侵权必究！授权事宜、对本内容有异议或投诉，敬请联系网站管理员，我们将尽快回复您，谢谢合作！